1.1體外透皮吸收試驗的流程和操作

體外透皮吸收試驗通常分為以下幾個步驟：

（1）樣品制備：將待測樣品按照一定比例配制成試驗用液體或藥膏。（2）制備皮膚：取自人類或動物皮膚的標(biāo)本都可使用。人類皮膚標(biāo)本可符合國家和國際倫理學(xué)委員會條約的規(guī)定[13]，首選活體皮膚,也可使用證明是完整的非活性皮膚標(biāo)本。表皮層(酶、熱或化學(xué)分離的)或用植皮刀分離的厚皮膚(典型的是200pm~400μm厚)都可選取。但應(yīng)避免使用太厚的(約大于1mm)皮膚,除非化學(xué)品較特殊,需用整個皮膚層來測試。應(yīng)確定皮膚種類、解剖位置以及制備技術(shù)。要求每個試驗樣品至少進(jìn)行四次重復(fù)試驗。

（3）涂抹藥劑：將待測藥劑均勻涂抹于透皮細(xì)胞模型上。

（4）等待吸收：根據(jù)實驗設(shè)計的要求，在一定時間內(nèi)等待藥劑在透皮細(xì)胞中發(fā)生吸收和代謝。（5）取樣分析：在不同的時間節(jié)點，用特定方法從透皮細(xì)胞模型上采集樣品，進(jìn)行分析和檢測。

1.2.影響透皮吸收的因素及調(diào)控方法

影響透皮吸收的因素主要包括物理、化學(xué)和生物學(xué)因素，如分子大小、分子量、溶解度、化學(xué)結(jié)構(gòu)、溫度、濕度、pH值等。為了準(zhǔn)確評價化妝品成分的透皮性能和毒理學(xué)效應(yīng)，需要對這些影響因素進(jìn)行有效的調(diào)控。

例如，可以通過改變涂抹面積、藥劑濃度、涂抹時間等參數(shù)，來控制藥劑的吸入速度和吸收程度。此外，還可以添加透皮增強劑或選擇合適的透皮細(xì)胞模型等方法，提高藥劑的滲透性和穿透力。同時，還需要對透皮細(xì)胞模型進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，以保證試驗結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。

二、體外透皮吸收試驗的常用模型

體外透皮吸收試驗常用的模型主要包括以下幾種：

2.1.人工合成膜模型

人工合成膜模型是一種采用合成材料制成的模型，其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)可以通過調(diào)整材料成分、厚度等因素進(jìn)行控制。這種模型具有批量生產(chǎn)、價格低廉、易于操作、可重復(fù)性強等優(yōu)點，但由于其與真實皮膚存在差異，透皮透過性和毒理學(xué)評估結(jié)果可能存在誤差。

2.2.動物皮膚模型

動物皮膚模型是使用動物組織制作的模型，其結(jié)構(gòu)和功能與真實皮膚比較接近。這種模型具有較好的透皮透過性和可靠性，但受到動物福利等倫理問題的限制，同時也存在動物皮膚與人類皮膚之間存在差異的問題。

2.3.人類皮膚模型

人類皮膚模型是使用人類皮膚組織制作的模型，其結(jié)構(gòu)和功能與真實皮膚非常相似。這種模型具有很好的代表性和可靠性，能夠更好地預(yù)測化妝品在人體中的行為和影響。然而，由于制備和操作成本較高，限制了其在實踐中的應(yīng)用。

不同種屬動物皮膚的特點對比如下：

三、體外透皮吸收試驗選擇技術(shù)指標(biāo)

2021年3月，國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品評審中心（Center for Drug Evaluation, CDE）發(fā)布了《皮膚外用化學(xué)仿制藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》，明確了體外透皮試驗的設(shè)計目的是模擬外用藥物在生理條件下的透皮過程，以反映外用制劑的質(zhì)量。

在試驗設(shè)計方面，相比于2018年發(fā)布的《新注冊分類皮膚外用仿制藥的技術(shù)評價要求（征求意見稿）》，新版指導(dǎo)原則刪除了原附件的內(nèi)容，并提出“體外透皮試驗建議參考國內(nèi)外相關(guān)指導(dǎo)原則開展相關(guān)研究工作”。

四、體外透皮吸收試驗的優(yōu)缺點

4.1.體外透皮吸收試驗的優(yōu)點包括：

（1）低成本：相對于動物試驗和臨床試驗，體外透皮吸收試驗具有較低的成本，并且不需要大量的實驗動物或人員參與。

（2）高通量：體外透皮吸收試驗可以進(jìn)行高通量篩選，同時可以同時測試多種不同的化妝品成分和配方，快速確定其透皮性能和毒理學(xué)效應(yīng)。

（3）可替代動物試驗：由于動物試驗受到倫理和法律等限制，體外透皮吸收試驗可以作為動物試驗的替代方法，以預(yù)測化妝品成分在人體內(nèi)的代謝和毒理學(xué)效應(yīng)。

4.2.體外透皮吸收試驗也存在一些缺點，包括：

（1）不能反映內(nèi)部毒理學(xué)效應(yīng)：體外透皮吸收試驗只能模擬化妝品成分在皮膚表層的滲透和吸收情況，無法反映其在體內(nèi)的代謝和毒理學(xué)效應(yīng)。

（2）無法模擬真實使用場景：體外透皮吸收試驗所采用的透皮細(xì)胞模型和試驗條件可能與真實使用場景存在差異，因此其結(jié)果可能不能完全代表化妝品在人體內(nèi)的真實行為和影響。

（3）結(jié)果可信度受到影響：體外透皮吸收試驗中涂抹面積、透皮時間、涂抹劑量等參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化和控制，以及透皮細(xì)胞模型的選擇和處理等因素，都可能會對試驗結(jié)果的可靠性產(chǎn)生影響。

綜上所述，體外透皮吸收試驗具有低成本、高通量和可替代動物試驗等優(yōu)點，但同時也存在一些缺點，如無法反映內(nèi)部毒理學(xué)效應(yīng)、無法模擬真實使用場景和結(jié)果可信度受到影響等。因此，在進(jìn)行化妝品安全性評估時，需要綜合考慮各種試驗方法的優(yōu)缺點，并采用多種試驗方法相結(jié)合的策略，以最大程度地提高評估結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。

五、體外透皮吸收試驗的應(yīng)用領(lǐng)域

體外透皮吸收試驗是一種常用的安全性評價實驗方法，主要應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

5.1.化妝品安全性評估：透皮吸收試驗被廣泛用于化妝品成分的透皮性能和毒理學(xué)效應(yīng)評估中。通過體外透皮試驗可預(yù)測不同化妝品成分在人體內(nèi)的滲透情況和可能產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，為化妝品的安全性評估提供參考依據(jù)。

5.2.藥物透皮吸收研究：藥物的透皮吸收是其治療作用的關(guān)鍵因素之一。透皮吸收試驗可以模擬藥物在人體表面的滲透和吸收過程，并分析其透皮性能參數(shù)，為藥物研發(fā)和臨床使用提供數(shù)據(jù)支持。

5.3.食品添加劑透皮吸收評價：食品添加劑在食品中的使用越來越廣泛，其對人體健康的影響備受關(guān)注。透皮吸收試驗可以評估食品添加劑在人體皮膚上的滲透和吸收情況，為食品添加劑的安全性評估和管控提供參考依據(jù)。

5.4醫(yī)療器械進(jìn)行透皮吸收評價：主要關(guān)注醫(yī)療器械在使用過程中與皮膚接觸時，其成分或釋放的物質(zhì)通過皮膚吸收的程度，并可能對人體產(chǎn)生的影響。醫(yī)療器械進(jìn)行透皮吸收評價是為了確保其在臨床使用中的安全性和有效性，同時滿足法規(guī)要求并為科學(xué)研究提供重要數(shù)據(jù)。這對于保障患者的健康權(quán)益和促進(jìn)醫(yī)療器械行業(yè)的發(fā)展具有重要意義。